人17-酮類固醇ELISA檢測(cè)試劑盒　　　　　　　　　　　　

本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：體液

試驗(yàn)原理：
　　　　17-KS試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知17-KS濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將17-KS和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中17-KS的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人17-酮類固醇ELISA檢測(cè)試劑盒　

操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人17-酮類固醇ELISA檢測(cè)試劑盒　

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

人17-酮類固醇ELISA檢測(cè)試劑盒　

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的17-KS標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的17-KS含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出濃度。

3、檢測(cè)值范圍：0-80umol/L

4、敏感度： 0.1 umol/L

ER-α（Estrpgen Receptor alpha） 雌激素受體α抗體 0.1ml
ER-α（Estrpgen Receptor alpha） 雌激素受體α抗體 0.2ml
ER-α/β Estrpgen Receptor α/β 雌激素受體α/β抗體 0.1ml
Phospho-FAK （Tyr407）  磷酸化粘著斑激酶抗體 0.1ml
phospho-FAK （Tyr577）  磷酸化粘著斑激酶抗體 0.1ml
phospho-FAK （Ser732）  磷酸化粘著斑激酶抗體 0.1ml
ER-α/β Estrpgen Receptor α/β 雌激素受體α/β抗體 0.2ml
ER-β （Estrogen receptor-β） 雌激素受體β 抗體 0.2ml
ER-β （Estrogen receptor-β） 雌激素受體β抗體 0.2ml
ESA/EPCAM （Epithelial specific antigen） 上皮特異性抗原抗體 0.1ml
ESA/EPCAM （Epithelial specific antigen） 上皮特異性抗原抗體 0.2ml
ET-1/PPET1（Endothelin-1） 內(nèi)皮素-1抗體 0.1ml
ET-1/PPET1（Endothelin-1） 內(nèi)皮素-2抗體 0.2ml
Ets1/ETS-1 Ets轉(zhuǎn)錄因子家族e(cuò)ts1抗體 0.2ml
Eukaryotic aspartyl protease（Rice） 天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗體（水稻蛋白的一種） 0.2ml
phospho-Bim（Ser55）  磷酸化細(xì)胞死亡調(diào)解子抗體 0.1ml
phospho-Bim（Ser69）  磷酸化細(xì)胞死亡調(diào)解子抗體 0.1ml
Phospho-BLNK（Tyr96）  磷酸化T淋巴細(xì)胞連接蛋白抗體 0.1ml
phospho-A Raf （Ser214）  磷酸化A-Raf抗體 0.1ml
Phospho-A Raf （Ser299）  磷酸化A-Raf抗體 0.1ml
EV71（Human enterovirus 71）VP1 腸道病毒71型/手足口病病毒抗體 0.1ml
EV71（Human enterovirus 71）VP1 腸道病毒71型/手足口病病毒抗體 0.2ml
EV71（Human enterovirus 71; VP1）（CT） 腸道病毒71型/手足口病病毒抗體（C端） 0.2ml
EXPB-2（beta-expansin）death inducer-obliterator-2 inducer-obliterator-2 植物延展素-β 0.2ml
Ezrin/Radixin 埃茲蛋白抗體 0.2ml
F1 operon positive regulatory protein（NT） 鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體（N端） 0.2ml
F1 operon positive regulatory protein（CT） 鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體（C端） 0.2ml
phospho-B-Raf （Ser365）  磷酸化B-Raf抗體 0.1ml
phospho-B-Raf （Ser445）  磷酸化B-Raf抗體 0.1ml
phospho-B-Raf （Ser601）  磷酸化B-Raf抗體 0.1ml
Phospho-BAP1 （Ser592）  磷酸化乳腺癌易感基因1抗體（人） 0.1ml
Fabp2 （fatty acid binding protein 2, intestinal） 脂肪酸結(jié)合蛋白2抗體 0.2ml
FABP（brain） （Fatty acid-binding protein brain）CT 腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體（C端） 0.2ml
FABPB （Fatty acid-binding protein brain） 腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
factor V（Vcoagulation factor） 凝血因子5抗體 0.2ml
factor VIII（FVIII） 第八因子相關(guān)抗原抗體 0.1ml
Phospho-Btk（Ser180）  磷酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗體 0.1ml
Phospho-Btk（Tyr223）  磷酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗體 0.1ml
Phospho-Troponin I （Ser23/24）  磷酸化鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體 0.1ml
phospho-CaMK2 alpha （Thr286）  磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體 0.1ml
Phospho-Cas （Tyr165）  磷酸化細(xì)胞凋亡敏感性基因 0.1ml
factor VIII（FVIII） 第八因子相關(guān)抗原抗體 0.2ml
factor ⅩⅢ（coagulation factor ⅩⅢ） 凝血因子13抗體 0.2ml
FADD/DAXX （Fas-associated protein with death domain） Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白 0.2ml
phospho-FADD（pSer194） 抗磷酸化Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
FAK（Focal adhesin kinase） 粘著斑激酶抗體 0.1ml
Phospho-Caspase-9 （Try153）  磷酸化半胱氨酸蛋白酶9抗體 0.1ml
Phospho-Caveolin-1 （Tyr14）  磷酸化細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體 0.1ml
phospho-Beta-catenin（Tyr142）  磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 0.1ml
Phospho-Beta-Catenin （Ser33/37）  磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 0.1ml
Phospho-Beta-Catenin （Ser45）  磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 0.1ml
FAK（Focal adhesin kinase） 粘著斑激酶抗體 0.2ml
phospho-FAK（pTyr577） 抗磷酸化粘著斑激酶抗體 0.2ml
FAF1（Fas associated factor 1） Fas相關(guān)1因子抗體 0.2ml
FANCF（Fanconi Anemia Complementation Group F） 范可尼貧血相關(guān)蛋白F抗體 0.2ml
FAM3B/PANDER（PANcreatic DERived factor） 胰腺衍生因子抗體 0.2ml
phospho-CBL2（Tyr731）  磷酸化原癌蛋白CBL2抗體 0.1ml